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作者簡介
名人/編輯推薦
目次
書摘/試閱
商品簡介
流式細胞術是現代生物學和醫學的常用技術，一經發明就被逐漸應用到細胞生物學、免疫學、發育生物學、生理學、植物學、分子生物學等基礎研究，醫學的臨床診斷和治療，以及農林畜牧養殖、藥品檢驗、食品檢驗、環境檢測等廣泛的領域。作者結合十多年的流式經驗，注重理論和實際、基礎和應用相結合，重點介紹了流式細胞術的原理、技術及方法，及時跟蹤展現了其最新成果和發展趨勢。書中列舉了大量有代表性的應用實例，詳細描述了其操作過程、實驗結果及詳盡的分析方法等，可為相關領域的科研和技術人員提供有力的技術支持。《流式細胞術（第二版）》可操作性強，圖文并茂。在第一版基礎上，（1）新版的部分章節改用了彩色圖譜，更便于讀者使用；（2）增加了“細胞增殖與死亡的檢測”一章，詳細描述流式細胞術在具體實驗中的應用方法；（3）各章節中都及時添加了最新進展和方法。《流式細胞術（第二版）》可作為高校生物、醫學、農林等高年級本科生、研究生教材，也可供科研人員和檢驗人員參考。
作者簡介
馮仁青，北京大學生命科學學院副教授,曾出版《現代抗體技術及其應用》等教材；杜立穎，北京大學生命科學學院實驗技師
名人/編輯推薦
本書注重理論和實際、基礎和應用相結合，重點介紹了流式細胞術的原理、技術及方法，并及時跟蹤展現了其最新成果和發展趨勢。書中列舉了大量有代表性的應用實例，可操作性強，可為相關領域的科研和技術人員提供有力的技術支持。全書圖文并茂，在第一版基礎上部分章節改用了彩色圖譜，更便于讀者使用。
目次
第一章 概述
第一節 什么是流式細胞術？
第二節 流式細胞術能做什么？
第三節 背景與回顧
第四節 儀器簡介
一、 BD公司
二、 Beckman Coulter公司
三、 ABI公司
四、 Union Biometrica公司
五、 Apogee 公司
六、 Partec公司
七、 Merck Millipore公司
第五節 前景與展望
一、 流式細胞術與顯微技術結合
二、 流式細胞術與質譜技術結合
參考文獻
第二章 流式細胞術原理
第一節 工作原理
第二節 液流系統
一、 鞘液
二、 噴嘴
三、 流式照射室
第三節 光學檢測系統
一、 激光和熒光
二、 激光照射液流
三、 光學信號
四、 光學元件
五、 光學信號檢測系統
第四節 電子控制系統
一、 光電檢測器
二、 通道
三、 閾值
小結
參考文獻
第三章 數據儲存與分析系統
第一節 數據儲存
第二節 數據分析
一、 常用術語
二、 流式圖譜的表現形式
三、 熒光補償
第三節 數據分析實例
實例一： 雙參數FSC/SSC分析
實例二： 三參數FSC/SSC/FL1分析
實例三： 四參數FSC/SSC/FL1/FL2簡單樣本分析
實例四： 四參數FSC/SSC/FL1/FL2復雜樣本分析
小結
參考文獻
第四章 細胞分選
第一節 細胞分選的原理
一、 液滴形成
二、 延遲時間
三、 液滴充電與偏轉
四、 液滴的收集
第二節 影響分選的因素
一、 分選速度
二、 分選門的設定
三、 分選模式
第三節 分選的質量控制與評價
一、 分選的準確性
二、 分選的效率
三、 無菌分選
四、 分選對細胞活性的影響
第四節 分選前的準備
一、 分選用細胞的制備要求
二、 準備的材料
三、 分選時需要考慮的幾個問題
第五節 細胞分選的應用實例
實例一： 單細胞分選
實例二： 回收極低比例（<0.01%）的細胞
實例三： 純化穩定的細胞系
實例四： 淋巴細胞分選
實例五： 組織特異性干細胞分選
實例六： 染料排異性干細胞分選
實例七： 精子分選
小結
參考文獻
第五章 細胞表面標志的檢測
第一節 血液細胞的檢測
第二節 細胞表面標志的染色技術
一、 細胞表面分化抗原
二、 直接染色法和間接染色法
第三節 對照的設置
一、 陰性對照
二、 同型對照
三、 陽性對照
四、 熒光補償
第四節 定量測定
一、 外標法
二、 內標法
三、 標準曲線法
四、 分辨率
第五節 設門的策略
一、 設門
二、 檢驗門
三、 熒光設門
四、 多色流式分析實例
小結
參考文獻
第六章 細胞內成分的檢測
第一節 流式細胞術檢測細胞內蛋白的特點
第二節 細胞內蛋白染色通則
一、 細胞內蛋白染色的步驟
二、 細胞內蛋白染色應遵循的原則
第三節 磷酸化蛋白的檢測
一、 固定和通透細胞
二、 熒光抗體染色
三、 優化染色方法
四、 多種磷酸化蛋白同時檢測
第四節 細胞因子的檢測
一、 T淋巴細胞的細胞因子檢測
二、 單核細胞的細胞因子檢測
三、 細胞內蛋白檢測的優缺點
第五節 微球免疫測定法
一、 CBA方法的原理
二、 CBA方法的流程
三、 CBA方法的檢測范圍
四、 CBA方法的優缺點
第六節 磷酸化蛋白與DNA同時檢測
小結
參考文獻
第七章 細胞核成分的檢測
第一節 常用的DNA染料
第二節 細胞周期
一、 細胞周期的定量分析方法
二、 粘連細胞的分析
三、 畫門方法
四、 BrdU/PI雙參數分析細胞周期
第三節 細胞周期的動態分析
一、 BrdU/PI雙參數檢測
二、 Hoechst/PI雙參數檢測
第四節 DNA總量分析和倍體分析
一、 DNA總量分析
二、 正常生物體的倍體分析
三、 腫瘤細胞的非整倍體分析
四、 植物倍體的分析
第五節 細胞同步化
一、 自然同步化
二、 人工同步化
第六節 DNA與RNA同時檢測
一、 吖啶橙（AO）同時檢測DNA與RNA
二、 Hoechst 33342/Pyronin Y同時檢測DNA和RNA
第七節 DNA與蛋白質同時檢測
一、 DNA和總蛋白同時檢測
二、 DNA和細胞周期蛋白同時檢測
第八節 染色體分析
小結
參考文獻
第八章 細胞增殖與死亡的檢測
第一節 細胞增殖的檢測
第二節 細胞凋亡的檢測
一、 散射光的檢測
二、 caspases酶檢測
三、 線粒體膜電位的檢測
四、 質膜的檢測
五、 DNA檢測
六、 細胞衰老與端粒測定
第三節 壞死細胞的檢測
一、 散射光的檢測
二、 膜通透性的檢測
第四節 細胞凋亡、死亡檢測中存在的問題
一、 細胞凋亡的頻率可能與細胞死亡的發生率無關
二、 以DNA片段來估計細胞凋亡頻率的困難
三、 將凋亡小體或核碎片誤判為凋亡細胞
四、 細胞凋亡、細胞壞死、細胞凋亡的"壞死階段"
五、 樣品制備過程中凋亡細胞的選擇性丟失
六、 吞噬凋亡小體的活細胞偽裝成凋亡細胞
七、 商業試劑/試劑盒存在的問題
八、 細胞形態仍然是鑒定凋亡細胞的黃金標準
小結
參考文獻
第九章 流式細胞術的應用概述
第一節 流式細胞術在生物學研究中的應用
一、 在細胞生物學中的應用
二、 在細胞周期研究和DNA倍體分析中的應用
三、 在細胞凋亡分析中的應用
四、 在染色體核型分析中的應用
五、 在分子遺傳學中的應用
六、 在免疫學中的應用
七、 在植物學中的應用
第二節 流式細胞術在醫學研究及臨床中的應用
一、 在腫瘤學中的應用
二、 在臨床細胞免疫學中的應用
三、 在血液病治療中的應用
四、 在血栓與出血性疾病治療中的應用
五、 生物學領域的其他應用
第三節 流式細胞術在農林畜牧養殖業中的應用
一、 在植物學中的應用
二、 在家畜性別控制中的應用
三、 在家畜疾病監控與預防中的應用
第四節 流式細胞術在微生物學中的應用
一、 在病原微生物研究中的應用
二、 在環境微生物研究中的應用
第五節 流式細胞術在食品、藥品檢測方面的應用
一、 在食品檢測中的應用
二、 在藥品檢測中的應用
第六節 流式細胞術新技術的應用
一、 CBA方法
二、 定量流式細胞術
小結
參考文獻
第十章 樣本制備和染色方法
第一節 單細胞懸液的制備
一、 小鼠末梢血的采集和單細胞懸液的制備
二、 小鼠胸腺的分離和單細胞懸液的制備
三、 小鼠骨髓的采集和單細胞懸液的制備
四、 密度梯度離心法制備外周血單個核細胞懸液
五、 小鼠脾臟的分離和單細胞懸液的制備
六、 小鼠成體乳腺單細胞懸液的制備
七、 小鼠胰腺細胞懸液的制備
第二節 熒光素標記抗體的制備
一、 FITC/ Texas Red 標記
二、 生物素標記
三、 Allophycocyanin（APC）或者Phycoerythrin（PE）標記
第三節 分析和分選用的細胞染色
一、 流式分析用的細胞染色方法
二、 流式分選用的細胞染色方法
三、 SP細胞的染色方法
四、 流式分選用的精子染色方法
第四節 細胞內分子染色
一、 常用的細胞固定方法
二、 細胞內分子的染色方法
三、 細胞內和細胞外分子同時染色的方法
第五節 細胞周期染色
一、 固定全細胞的PI染色方法
二、 非固定細胞的無洗染色方法
三、 BrdU染色方法
四、 植物細胞的DNA染色方法
第六節 細胞同步化實驗方法
一、 過剩胸腺嘧啶脫氧核苷法--S期細胞同步化
二、 羥基脲法--S期細胞同步化
三、 秋水仙胺法--M期細胞同步化
四、 血清饑餓法--G0期細胞同步化
五、 G1期和G2期細胞同步化實驗方法
第七節 DNA和RNA同時染色
一、 Hoechst 33342/PY同時檢測DNA和RNA
二、 吖啶橙（AO）同時檢測DNA和RNA
第八節 細胞凋亡染色
一、 PI染色法--DNA凋亡峰的檢測
二、 Annexin V/PI雙染色法
三、 Hoechst 33342/PI雙染色法
四、 TUNEL染色法
小結
參考文獻
附錄
一、 流式細胞術相關網址
二、 流式細胞術相關實驗方法網址
三、 熒光素試劑公司
四、 熒光光譜網址
五、 熒光素激發和發射光譜一覽表
書摘/試閱
一、鞘液
液體在高壓下形成一個圓柱形液流，細胞從液流的中心流人，這樣，液體就像一個“鞘”一樣包在樣品外面，因此，流式細胞儀中使用的液體被形象地稱為鞘液（sheathfluid）。鞘液通常是緩沖液，根據不同細胞適宜的培養條件不同，鞘液的成分可以作適當的改變。在分析動物細胞時，鞘液通常使用磷酸鹽緩沖溶液。鞘液裝在耐高壓的容器中，這種容器稱為鞘液罐。由氮氣或空氣給鞘液罐提供壓力把鞘液壓出，鞘液經過濾器（0.2μm）過濾掉里面的雜質顆粒，再通過耐壓塑料管流到照射室。同時，這一壓力系統也連接到裝有細胞的試管（稱為樣品池）中，通過塑料管把細胞壓到鞘液中心。
在流式測定中，液流保持平穩是非常重要的。這取決于兩個因素：一是采用的液流系統。單鞘液系統的位置精度在±2μm，雙鞘液系統的位置精度在±0.5μm，雙鞘液系統相對穩定，因此，新型的流式細胞儀多采用雙鞘液系統。二是樣品壓力與鞘液壓力之間的壓力差。在這個系統中，壓力差的大小將會影響細胞流過照射激光束時的準確性和穩定性。壓力差小，樣品聚集在液流中較窄的范圍內，細胞較均勻地依次排列于液流中心，依次被激光束照射，檢測的是單個細胞的信號。選擇合適的壓力差，分析和分選的結果準確，儀器不易被堵塞。如果壓力差增大，樣品在液流中分布變寬，細胞分布散亂，容易造成細胞之間距離太接近，甚至粘連到一起，流過激光束時，幾個細胞同時被照射，壓力差大導致的結果就是細胞粘連在一起，測量準確性差，儀器容易被堵塞。這種現象直接反映在流式圖譜中，顯示出信號被不適當地放大，見圖2.2。所以，在流式測定中應選擇合適的壓力差。
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