微生物實驗技術（簡體書）

《高等職業教育“十二五”規劃教材：微生物實驗技術》內容主要包括顯微鏡的使用技術，微生物形態結構的觀察，細菌染色技術，培養基的製備及滅菌技術，微生物接種及厭氧培養技術，微生物生長規律，微生物生理生化反應，菌種保藏等。在教學過程中可根據培養目標及實驗、實訓條件有針對性地進行教學。《高等職業教育“十二五”規劃教材：微生物實驗技術》既可作為高職高專院校生物技術類專業教材，也可供生物技術應用領域工程技術人員參考。

《高等職業教育"十二五"規劃教材:微生物實驗技術》既可作為高職高專院校生物技術類專業教材，也可供生物技術應用領域工程技術人員參考。

項目一 微生物實驗室建設與管理
任務一 微生物實驗守則
任務二 微生物實驗室的基本建設設施

項目二 顯微技術
任務一 普通光學顯微鏡的使用
任務二 暗視野光學顯微鏡的使用
任務三 相差顯微鏡的使用
任務四 電子顯微鏡的使用

項目三 微生物形態特徵觀察
任務一 細菌的形態觀察
任務二 放線菌的形態觀察
任務三 黴菌的形態觀察
任務四 酵母菌的形態觀察
任務五 酵母菌子囊孢子的觀察
任務六 微生物菌落特徵的觀察
任務七 微生物大小的測定

項目四 細菌染色技術
任務一 細菌的革蘭染色
任務二 細菌芽孢染色
任務三 細菌的莢膜染色
任務四 細菌鞭毛染色及運動性觀察
任務五 細菌細胞壁及細胞質膜的染色

項目五 培養基的製備
任務一 常用玻璃器皿的清洗包紮
任務二 牛肉膏蛋白腖培養基的配製
任務三 馬鈴薯葡萄糖培養基的配製
任務四 高氏1號培養基的配製
任務五 馬丁培養基的配製
任務六 伊紅美藍培養基的配製
任務七 血液瓊脂培養基的配製
任務八 明膠瓊脂培養基的配製
任務九 石蕊牛奶培養基的配製
任務十 麥芽汁培養基的配製

項目六 滅菌技術
任務一 千熱滅菌技術
任務二 高壓蒸汽滅菌技術
任務三 常壓蒸汽滅菌技術
任務四 紫外線滅菌技術
任務五 過濾除菌技術
任務六 其他消毒滅菌方法

項目七 微生物接種及培養技術
任務一 劃線接種技術
任務二 塗布接種技術
任務三 澆混接種技術
任務四 穿刺接種技術
任務五 液體接種技術
任務六 點接種技術
任務七 厭氧微生物的培養技術

項目八 微生物生長繁殖測定技術
任務一 微生物直接計數法——顯微直接計數法
任務二 微生物間接計數法——平板菌落計數法
任務三 細菌生長曲線的測定——比濁法
任務四 黴菌生長曲線的測定
任務五 噬菌體效價的測定

項目九 環境因素對微生物生長發育的影響
任務一 氧對微生物生長的影響
任務二 溫度對微生物的影響
任務三 滲透壓對微生物的影響
任務四 pH對微生物生長的影響
……
項目十 微生物生理生化反應
項目十一 菌種保藏技術
項目十二 微生物綜合性實驗
附錄
參考文獻

滴加10％NaOH溶液約2mL于焦性沒食子酸上，切勿使溶液溢出棉花，立即將已接種的平板覆蓋于玻璃板上或培養皿蓋上，必須將脫脂棉全部罩住，而焦性沒食子酸反應物不能與培養基表面接觸。
以溶化的石蠟凡士林液密封皿底與玻板或皿蓋的接觸處。
置30℃培養，定期觀察平板上菌種的生長狀況并記錄。
由于焦性沒食子酸遇堿性溶液后即會迅速發生反應并開始吸氧，所以在采用此法進行厭氧微生物培養時必須注意只有在一切準備工作都已齊備后再向焦性沒食子酸上滴加NaOH溶液，并迅速封閉大試管或平板。
2.厭氧罐培養法
（1）用牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基倒平板。培養基凝固后，取兩個平板，每個平板均同上法同時劃線接種巴氏芽孢梭菌和熒光假單胞菌，并做好標記。取其中的一個平板置于厭氧罐的培養皿支架上，然后放入厭氧培養罐內。另一個平板直接置于30℃培養箱中培養。
（2）將已活化的催化劑倒入厭氧罐罐蓋下面的多孔催化劑小盒內，旋緊。
目前厭氧罐培養法中使用的催化劑是將鈀或鉑經過一定處理后包被于還原性硅膠或氧化鋁小球上形成的“冷”催化劑，它們在常溫下即具有催化活性，并可反復使用。由于在厭氧培養過程中形成水汽。硫化氫、一氧化碳等都會使這種催化劑受到污染而失去活性，所以這種催化劑在每次使用后都必須在140～160％的烘箱內烘1～2h，使其重新活化，并密封后放在干燥處直到下次使用。
（3）剪開氣體發生袋的一角，將其置于罐內金屬架的夾上，再向袋中加入約10mL水。同時，由另一同學配合，剪開指示劑袋，使指示條暴露（還原態為無色，氧化態為藍色），立即放入罐中。
（4）迅速蓋好厭氧罐罐蓋，將固定梁旋緊，置30℃溫室培養，觀察并記錄罐內情況變化及菌種生長情況。
必須在一切準備工作齊備后再往產氣袋中注水，而加水后應迅速密閉厭氧罐，否則，產生的氧氣過多地往外泄，會導致罐內厭氧環境的失敗。
3.庖肉培養基法
（1）接種
①將蓋在培養基液面的石蠟凡士林先于火焰上微微加熱，使其邊緣熔化，再用接種環將石蠟凡士林塊撥成斜立或直立在液面上。
②用接種環或無菌滴管接種。
③接種后再將液面上的石蠟凡士林塊在火焰上加熱使其溶化。
④將試管直立靜置，使石蠟凡士林凝固并密封培養基液面。
如果配好的庖肉培養基試管已放置了一段時間，則接種前應將其置沸水浴中再加熱10min，以除去溶入的氧。剛滅完菌的新鮮庖肉培養基可先接種后再用石蠟凡士林封閉液面，這樣可避免一些操作上的麻煩。
在用火焰溶化培養基液面上的石蠟凡士林時應注意不要使下面的培養基的溫度也升得太高，以免燙死剛接入的菌種。
（2）培養將分別接種了巴氏芽孢梭菌和熒光假單胞菌的庖肉培養基置30℃培養箱中培養，并注意觀察培養基肉渣顏色的變化和熔封石蠟凡士林層的狀態。
對于一般的厭氧菌，接了種的庖肉培養基可直接放在溫室里培養。而對于一些對厭氧環境要求比較苛刻的厭氧菌，接了種的庖肉培養基應先放在厭氧罐中，然后再放入培養箱中培養。