生物化學實用技術（簡體書）

《生物化學實用技術》是校企合作共建教材，教材按“工學結合”的要求設計內容，將企業崗位標準操作規程引入教材，兼顧學生自學、教師教學和企事業單位生化檢驗人員培訓各方面需求，注重學生實踐能力和全面素質的培養。全書共分七章，內容主要包括生物化學實驗基本技能訓練、氨基酸生化產品的制備和檢測、多?和蛋白質生化產品的制備和檢測、?類生化產品的制備和檢測、核酸生化產品的制備和檢測、糖類生化產品的制備和檢測、脂類生化產品的制備和檢測。
《生物化學實用技術》適合于高職高專生物技術類、食品類、制藥類和環境類專業的學生作為理論和實訓教材，也可供從事相關工作的技術人員作為培訓教材或參考書使用。

《生物化學實用技術》是國家示范性高職院校建設項目成果系列教材之一。

項目一 生物化學實驗基本技能訓練
一、學習生物化學實用技術的目的
二、生物化學實用技術的學習方法
三、生物化學實驗室的安全知識
（一）實驗室安全的預防措施
（二）實驗室傷害的救護措施
四、生物化學實驗的基礎知識
（一）化學試劑及其取用
（二）化學溶液及其配制
（三）常用儀器及其操作
五、常用的生物化學實驗技術及原理
（一）生物大分子的制備和保存技術
（二）色譜分離技術
（三）分光光度技術
（四）電泳技術

項目二 氨基酸生化產品的制備和檢測
一、項目介紹
二、學習目標
三、背景知識
（一）氨基酸的定義
（二）氨基酸的功能
（三）基本氨基酸的組成
（四）氨基酸的分類
（五）氨基酸的性質
（六）氨基酸的生物分解代謝
（七）氨基酸的生物合成代謝
（八）氨基酸的制備方法
（九）氨基酸的鑒定方法
四、項目實施
訓練任務氨基酸的分離鑒定
五、拓展訓練
設計任務一人發中L精氨酸的提取
設計任務二脯氨酸含量的測定

項目三 多?和蛋白質生化產品的制備和檢測
一、項目介紹
二、學習目標
三、背景知識
（一）蛋白質的功能
（二）蛋白質的分類
（三）蛋白質的組成
（四）蛋白質的結構
（五）蛋白質的結構與功能的關系
（六）蛋白質的性質
（七）蛋白質的分離純化技術
（八）蛋白質的定量技術
（九）蛋白質分子量的測定
（十）蛋白質一級結構的測定
四、項目實施
訓練任務一 牛乳中酪蛋白和乳清蛋白的提取
訓練任務二 蛋白質的純化——葡聚糖凝膠柱色譜
訓練任務三 綠豆芽中蛋白質含量的測定——分光光度法
訓練任務四 未知蛋白質分子量的測定——SDS聚丙烯?胺凝膠電泳

項目四 ?類生化產品的制備和檢測
一、項目介紹
二、學習目標
三、背景知識
（一）?的概念
（二）?的特性
（三）?的分類
（四）?的命名
（五）?的分子結構
（六）?的作用機理
（七）?促反應動力學
（八）?活性的調節與控制
（九）維生素
（十）?的分離提純技術
（十一）?活力的測定
四、項目實施
訓練任務一 植物組織中過氧化物?的分離與純化
訓練任務二 植物組織中過氧化氫?的活力測定
訓練任務三 水果或蔬菜中維生素C含量的測定
五、拓展訓練
設計任務一 小麥種子中淀粉?活力測定
設計任務二 植物葉片硝酸還原?活性的測定

項目五 核酸生化產品的制備和檢測
一、項目介紹
二、學習目標
三、背景知識
（一）核酸的化學組成
（二）核酸的分類及功能
（三）核酸的結構
（四）核酸的性質
（五）核酸的制備技術
（六）核酸含量的測定方法
（七）核酸序列的測定方法
四、項目實施
訓練任務一 大腸桿菌基因組DNA的提取
訓練任務二 DNA的鑒定——瓊脂糖凝膠電泳技術
訓練任務三 DNA的含量測定——分光光度技術
訓練任務四 酵母菌目標基因的體外擴增——PCR技術
五、拓展訓練
設計任務一 質粒DNA的提取和測定
設計任務二 植物DNA的提取和測定

項目六 糖類生化產品的制備和檢測
一、項目介紹
二、學習目標
三、背景知識
（一）糖的概念
（二）糖的功能
（三）糖的分類
（四）單糖的結構和性質
（五）雙糖的結構與性質
（六）多糖的結構與性質
（七）糖的生物分解代謝
（八）糖的合成代謝
（九）糖含量測定方法
（十）糖分子量的測定方法
四、項目實施
訓練任務一 食品中還原糖含量的測定
訓練任務二 血糖含量的測定
五、拓展訓練
設計任務香菇多糖的提取

項目七 脂類生化產品的制備和檢測
一、項目介紹
二、學習目標
三、背景知識
（一）脂類的概念
（二）脂類的生物學功能
（三）脂類的分類
（四）油脂
（五）類脂
（六）脂肪的分解代謝
（七）脂肪的合成代謝
（八）脂肪酸分解代謝與合成代謝途徑的比較
（九）食品中脂肪含量的測定
四、項目實施
訓練任務花生中脂含量的測定
五、拓展訓練
設計任務蛋黃中卵磷脂（或膽固醇）的提取
附錄一 常用生化緩沖溶液的配制
附錄二 常用指示劑的配制
附錄三 常見市售酸堿的濃度
附錄四 分子生物學常用溶液配制
參考文獻

3.蛋白質的純化技術
（1）根據蛋白質溶解度不同的分離方法
?蛋白質的鹽析中性鹽對蛋白質的溶解度有顯著影響，一般在低鹽濃度下隨著鹽濃度升高，蛋白質的溶解度增加，稱為鹽溶；當鹽濃度繼續升高時，蛋白質的溶解度不同程度下降并先後析出，這種現象稱鹽析。將大量鹽加到蛋白質溶液中，高濃度的鹽離子有很強的水化力，可奪取蛋白質分子的水化層，使之“失水”，于是蛋白質膠粒凝結并沉淀析出。鹽析時若溶液pH在蛋白質等電點則效果更好。由于各種蛋白質分子顆粒大小、親水程度不同，故鹽析所需的鹽濃度也不一樣，因此調節混合蛋白質溶液中的中性鹽濃度可使各種蛋白質分段沉淀。影響鹽析的因素如下。a.溫度：除對溫度敏感的蛋白質在低溫（4℃）操作外，一般可在室溫進行。一般溫度低蛋白質溶解度降低。但有的蛋白質（如血紅蛋白、肌紅蛋白、清蛋白）在較高的溫度（25℃）比0～C：時溶解度低，更容易鹽析。b.pH值：大多數蛋白質在等電點時在濃鹽溶液中的溶解度最低。c.蛋白質濃度：蛋白質濃度高時，欲分離的蛋白質常常夾雜著其他蛋白質一起沉淀出來，因此在鹽析前血清要加等量生理鹽水稀釋，使蛋白質含量在2.5％～3.0％。蛋白質鹽析常用的中性鹽，主要有硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、氯化鈉、磷酸鈉等。其中應用最多的是硫酸銨，它的優點是溫度系數小而溶解度大（25℃時飽和溶解度為4.1mol／L，即767g／L；0～C時飽和溶解度為3.9mol／L，即676g／L），在這一溶解度范圍內，許多蛋白質和?都可以鹽析出來；另外硫酸銨分段鹽析效果也比其他鹽好，不易引起蛋白質變性。硫酸銨溶液的pH常在4.5～5.5，當用其他pH值進行鹽析時，需用硫酸或氨水調節。蛋白質在用鹽析沉淀分離後，需要將蛋白質中的鹽除去。除鹽常用的辦法是透析，即把蛋白質溶液裝入透析袋內（常用的是玻璃紙），用緩沖液進行透析，并不斷更換緩沖液，因透析所需時間較長，所以最好在低溫進行。此外也可用葡聚糖凝膠G25或G50過柱的辦法除鹽，所用的時間較短。