缺氧誘導小分子RNA調控腎癌侵襲轉移的分析與研究（簡體書）

本書借助高通量基因表達數據庫，使用生物信息學方法，分析腎細胞癌的高通量測序大數據，進而通過miRNA芯片技術，分析臨床ccRcc患者腫瘤與癌旁組織中的miRNAs，兩者交叉驗證，篩選出參與腎癌發病過程的miRNAs，探究其作用機制，最終為檢測和治療腎癌提供新的理論依據，從而促進腎癌的機制研究、臨床診斷和治療。本書適合高校醫學專業師生及相關研究人員閱讀。

總序

論叢前言

前言

第1章 GEO中腎透明細胞癌高通量測序數據庫的生物信息學分析

1.1 概述

1.2 疾病相關的基因芯片數據庫發掘臨床腫瘤新標靶

第2章 人腎透明細胞癌中的miRNA表達譜芯片檢測及靶基因分析

2.1 材料與方法

2.1.1 實驗設備及主要儀器

2.1.2 主要實驗試劑及試劑盒

2.1.3 miRNA芯片實驗方法

2.2 miRNA芯片數據的分析方法

2.2.1 差異miRNA的篩選

2.2.2 基因功能的顯著性分析(G0-Analysis)

2.2.3 基因通路的顯著性分析(Pathway-Analysis)

2.3 結果

2.3.1 腎癌標本臨床及病理資料

2.3.2 miRNA芯片實驗結果和熱圖分析

2.3.3 腎癌標本中差異miRNAs的靶基因分析

2.3.4 腎癌標本中差異靶基因的顯著性功能分析(GO Analysis)

2.3.5 腎癌標本中差異基因的顯著性pathway分析和其調控網路分析

2.4 討論

2.5 結論

第3章 腎透明細胞癌組織中miR-646、相關基因檢測及其與腫瘤患者臨床相關因素分析

3.1 材料

3.1.1 臨床樣本

3.1.2 實驗用試劑

3.1.3 實驗用儀器

3.2 方法

3.2.1 miRNA熒光定量PCR操作流程

3.2.2 靶基因NOBl和SLC4Al檢測

3.2.3 靶基因NOBl和SLC4A1的蛋白表達水平檢測(Western blot)

3.2.4 免疫組織化學檢測NOBl蛋白表達

3.2.5 統計分析方法

3.3 結果

3.3.1 腎透明細胞癌中miR-646和NOBl的表達情況和單變量和多變量風險模型分析

3.3.2 不同級別腎透明細胞癌中NOBl的表達情況及其與臨床病理特徵的關係

3.4 討論

3.5 結論

第4章 miR-646靶基因驗證及其在腎透明細胞癌中的作用及機制研究

4.1 材料和儀器

4.1.1 細胞系及動物模型

4.1.2 細胞培養基質粒抽提相關試劑盒

4.1.3 實驗主要儀器

4.2 方法

4.2.1 靶基因雙熒光素酶活性檢測

4.2.2 轉染後腎癌細胞系和293T細胞中miR-646和相關因的表達水平檢測

4.2.3 轉染miR-646後腎透明細胞癌細胞增殖影響的檢測(MTT法)

4.2.4 轉染miR-646後腎透明細胞癌細胞遷移的檢測(Wound healing法)

4.2.5 轉染miR-646後腎透明細胞癌細胞凋亡的檢測(FACS)

4.2.6 轉染miR-646後腎透明細胞癌細胞侵襲的檢測(Transwell小室)

4.2.7 血管生成實驗(.Angiogenesis)，體外條件下腎細胞癌細胞與HUVE(人臍帶血內皮細胞)共培養檢測血管形成能力

4.2.8 蛋白質芯片檢測miR-646對腎透明細胞癌細胞的下游靶基因及通路的相關蛋白表達變化

4.2.9 小鼠成瘤實驗檢測miR-646和NOBl-shRNA對腎癌細胞裸鼠體內成瘤性的影響

4.3 結果

4.3.1 786-0、ACHN和Caki-2腎癌細胞株中miR的表達水平

4.3.2 miR-646靶基因生物信息學預測

4.3.3 293-T細胞中miR-646靶向調控NOBl的雙熒光素酶活性的檢測

4.3.4 腎透明細胞癌中過表達或干擾miR-646後對靶基因NOBl基因和蛋白表達的影響

4.3.5 miR-646對腎癌細胞增殖和細胞週期的影響

4.3.6 miR-646對腎癌細胞遷移和侵襲功能的影響

4.3.7 細胞克隆實驗檢測miR-646對腎癌細胞增殖生長的影響

4.3.8 體外血管生成實驗(Angiogenesis)檢測miR-646對腎癌細胞血管形成影響

4.3.9 體內實驗進一步驗證體外細胞功能實驗：miR-對腎癌細胞裸鼠成瘤性的影響

4.3.10 miR-646可直接靶向NOBl基因，間接影響SLC4A1基因的表達水平

4.3.11 miR-646靶向NOBl基因對MAPK通路的調控機制

4.4 討論

4.5 小結

第5章 總結與展望

5.1 結論

5.2 進一步工作的方向

參考文獻

後記

附錄綜述