Investigação de mecanismos citotóxicos em células NK humanas

As c幨ulas assassinas naturais (NK) fazem parte do sistema imunit嫫io inato. Elas formam uma sinapse imunol鏬ica (IS) com c幨ulas-alvo infectadas ou tumorig幯icas e as matam atrav廥 de receptores de morte (ligante Fas CD95 e receptor Fas CD178) ou atrav廥 da liberta誽o de perforina e granzima em gr滱ulos l癃icos. A liga誽o Fas-FasL induz a apoptose. A liberta誽o de perforina pode provocar a lise direta das c幨ulas-alvo (necrose) ou levar ?penetra誽o de granzimas na c幨ula-alvo, o que induz a apoptose. Ambas as mortes de c幨ulas-alvo dependentes de NK foram descritas na literatura, mas as an嫮ises populacionais foram realizadas apenas atrav廥 de ensaios de ponto final. A regula誽o din滵ica da apoptose e necrose dependentes de NK das c幨ulas-alvo ao n癉el de c幨ulas individuais ainda n緌 foi estudada. Para estudar processos din滵icos de c幨ulas individuais, as c幨ulas-alvo que podem ser mortas por c幨ulas NK humanas foram transfectadas de forma est嫛el com um sensor de morte celular. Este ensaio permite a classifica誽o de apoptoses e necroses de c幨ulas individuais atrav廥 de diferentes padr髊s de fluoresc瘽cia do sensor baseado em FRET.