茶葉生物化學實驗指導（簡體書）

楊曉萍，博士，華中農業大學茶學系副教授、碩士研究生導師，長期從事茶葉功能化學、茶葉深加工與綜合利用、天然產物化學等方面的教學和研究工作。為湖北省茶葉學會理事、湖北省科技特派員、湖北省“三區”科技人才。主持和參加、省部級科研項目十多項，以作者或通信作者身份發表學科科研論文60余篇（其中SCI收錄論文14篇）、授權國家發明專利4項，主持省級教改項目1項、發表教學研究論文4篇。主編部級規劃教材及學術專著多部。

本教材由華中農業大學、西南大學、福建農林大學、云南農業大學、江西農業大學多位長期從事茶葉生物化學理論和實踐教學的教師，在總結多年實踐和研究經驗及參閱大量文獻基礎上共同編寫而成，結合現今生產實際，難度適宜，符合新時期大學生使用。

茶葉生物化學是生物化學滲透到制茶學、茶樹栽培學、茶葉審評與檢驗、茶葉深加工與綜合利用等茶葉學科後形成的一門交叉學科，是為茶葉生產、加工、綜合利用等提供有關化學及生物化學理論依據、指導茶葉生產的一門基礎科學。茶葉生物化學的發展與現代實驗手段和實驗技術的進步密切相關。因此，茶葉生物化學實驗是茶葉生物化學課程的重要組成部分?能夠幫助學生把課堂講解的理論知識與實際相結合，通過實踐使學生掌握茶葉生物化學基本實驗技術及操作技能，驗證、鞏固、加深學生對基礎理論知識的理解和認識，培養學生的動手能力，加強基本實驗技能的訓練，培養學生嚴謹的科學態度，提高分析問題和解決問題的能力，促進學生創新意識和綜合素質的培養。

本教材由華中農業大學、西南大學、福建農林大學、云南農業大學、江西農業大學多位長期從事茶葉生物化學理論和實踐教學的教師，在總結多年實踐和研究經驗及參閱大量文獻基礎上共同編寫而成。本教材由基礎知識和基本技能、實驗技術組成，其中實驗技術共設45個實驗項目。全書由華中農業大學楊曉萍擔任主編並統稿。

本教材既可作為高等院校茶學類專業實驗教材，也可供學生畢業論文實踐及農林院校相關師生和科研人員參考，還可供茶葉質量檢驗等茶產業從業人員參閱。

本教材在編寫過程中參考和借鑒了大量文獻資料，得到了相關院校和同人的大力支持，華中農業大學園藝林學學院給予了極大的關心和幫助，華中農業大學茶學專業碩士研究生王旭捷、李玉壬、陳春鳳、楊慧收集了相關資料，在此表示衷心感謝。

由於編寫時間倉促，編者水平有限，書中難免有錯漏和不足之處，懇請專家、學者批評指正。

第1章 茶葉生物化學實驗基礎知識和基本技能
第1節 生物化學實驗基礎知識
一、生物化學實驗室的安全要求
二、環境保護與廢棄物處理
三、常用玻璃儀器的洗滌、乾燥與保養
第二節 茶葉樣品的采集和保存
一、茶葉樣品的采集
二、茶葉樣品的運輸與保存
三、茶葉樣品的制備
第三節 實驗結果的處理
一、測定結果的準確度與精密度
二、誤差與消除
三、有效數字及運算規則
四、實驗記錄
五、數據的統計處理
第二章 茶葉生物化學實驗技術
第1節 茶葉化學成分測定
實驗一 茶葉中水分含量的測定
實驗二 茶葉水浸出物含量的測定
實驗三 茶葉中茶多酚類含量的測定
實驗四 茶葉中黃酮類化合物總量的測定
實驗五 茶葉中兒茶素總量及組分的測定
實驗六 茶葉中花青素含量的測定
實驗七 茶葉中咖啡因含量的測定
實驗八 茶葉中可溶性糖總量的測定
實驗九 茶葉中可溶性果膠含量的測定
實驗十 茶葉中粗纖維含量的測定
實驗十一 茶葉中遊離氨基酸總量的測定
實驗十二 茶葉中茶氨酸含量的測定
實驗十三 茶葉中蛋白質含量的測定
實驗十四 茶葉中維生素C含量的測定
實驗十五 茶葉中葉綠素總量及組分測定
實驗十六 紅茶中茶黃素、茶紅素、茶褐素含量的測定——系統分析法
實驗十七 茶葉中茶黃素含量的測定——高效液相色譜法
實驗十八 茶葉中灰分的測定
實驗十九 茶葉中硒含量的測定
實驗二十 茶葉中氟含量的測定
實驗二十一 茶葉中錳含量的測定
第二節 茶葉中酶活性分析
實驗二十二 茶葉中多酚氧化酶活性的測定
實驗二十三 茶葉中過氧化氫酶活性的測定
實驗二十四 茶葉中過氧化物酶活性的測定
實驗二十五 茶葉中苯丙氨酸解氨酶活性的測定
實驗二十六 茶葉中果膠酶活性的測定
實驗二十七 茶葉中脂肪氧化酶活性的測定
第三節 茶葉中有毒有害物質的測定
實驗二十八 茶葉中鉛含量的測定
實驗二十九 茶葉中銅含量的測定
實驗三十 茶葉中砷含量的測定
實驗三十一 茶葉中亞硝酸鹽與硝酸鹽含量的測定
實驗三十二 茶葉中吡蟲啉殘留的測定
實驗三十三 茶葉中有機磷、有機氯及擬除蟲菊酯三類農藥殘留量的測定
實驗三十四 茶葉中黃曲霉毒素含量的測定
第四節 茶葉中微生物的檢測
實驗三十五 茶葉中細菌總數的測定
實驗三十六 茶葉中大腸菌群的計數
實驗三十七 茶葉中霉菌和酵母的計數
實驗三十八 茶葉中金黃色葡萄球菌的檢測
第五節 茶葉生物活性成分的分離制備
實驗三十九 茶多酚的分離制備
實驗四十 咖啡因的分離制備
實驗四十一 茶黃素的分離制備
實驗四十二 兒茶素單體的分離制備
實驗四十三 茶氨酸的分離制備
實驗四十四 茶皂素的分離制備
實驗四十五 茶多糖的分離制備

附錄
附錄一 36種農藥的保留時間、定量離子、定性離子及定量離子與定性離子豐度比值
附錄二 36種農藥選擇離子監測分組和選擇離子表
參考文獻

一、生物化學實驗室的安全要求
1、生物化學實驗室規則
（1）進入實驗室前必須認真閱讀實驗教材，做好實驗預習，了解實驗的基本原理、方法、步驟，以及有關的基本操作和注意事項。
（2）遵守紀律，不遲到、早退和無故缺席；不在實驗室內打鬧、大聲喧嘩；不準隨地吐痰和亂丟紙屑，衣著整潔，衣冠得體。
（3）進入實驗室工作時應穿清潔的白色工作服，應養成在工作前和工作後洗手的習慣。
（4）實驗前應檢查儀器設備；實驗時應嚴格遵守實驗操作規程，確保儀器使用安全，節約用水、電、藥品、試劑等；不準擅自動用與本實驗無關的儀器設備。
（5）實驗時要注意安全，發生事故應立即切斷電源、氣源，並及時向指導教師如實報告。實驗中，要認真如實地記錄各種實驗數據和現象，不得偽造和抄襲他人的實驗記錄。
（6）實驗結束後，應將儀器設備整理歸位，指定值日學生打掃衛生。實驗室內應設置廢液缸和廢物紙屑簍。廢液倒入廢液缸；有放射性物質的廢水、廢物不要隨便亂倒，應作適當處理；破碎的玻璃儀器好不要與廢物一起倒掉，應有回收箱；固體廢物、紙屑、料渣等不允許往自來水水盆裡倒，以免堵塞下水道。
（7）實驗後要認真填寫實驗報告，包括實驗原理、步驟、結果數據處理，回答實驗思考題等。
（8）進入實驗室開始工作前，應了解水閥、電分閘及總閘和（煤）氣閥開關所在位置。離開實驗室時，一定要將室內仔細檢查一遍，將水、電、（煤）氣的開關關閉，門窗鎖好，同時嚴禁將實驗儀器和藥品帶出實驗室。
2、生物化學實驗室的試劑管理
（1）化學試劑的分類、分級和規格
化學試劑數量繁多，種類複雜，世界各國對化學試劑的分級和分類標準不盡一致，如根據試劑用途可分為分析試劑、儀器分析專用試劑、生化試劑、指示劑、醫用試劑等；根據試劑純度可分為一般試劑、基準試劑、高純試劑、光譜純試劑、優級純試劑、分析和化學純試劑等。我國化學試劑產品有國家標準（GB）或部頒標準（HG），規定了各級化學試劑的純度及雜質含量，並規定了標準分析方法。
下面暫將化學試劑分為標準試劑、一般試劑、高純試劑和專用試劑四大類，並逐一作簡單介紹。標準試劑是用於衡量其它（欲測）物質化學量的標準物質；其特點是主體含量高且準確度高。一般試劑是實驗室普遍使用的試劑，一般可分為四個等級及生化試劑；我國生產的一般試劑的分級、標志、適用範圍及標籤顏色見表1-1。