乳酸細菌現代研究實驗技術（簡體書）

《乳酸細菌現代研究實驗技術》是作者編著的有關乳酸細菌的多部專著之一。全書共介紹了近200個研究實驗方法，既有堅實的理論基礎，又有豐富的實驗經驗，內容新穎、全面、系統，能反映本領域國內外的最新研究成果和高新技術，為研究乳酸細菌的分類和鑒定提供了現代的和傳統的技術；為探討乳酸細菌的生理功能和安全問題提供了方法；為乳酸細菌在各個領域的應用提供了實驗技能；為乳酸細菌改造提供了基因重組的手段。所以本書是乳酸細菌領域關於研究、開發、生產、使用的一本重要工具書。

郭興華，中國科學院微生物研究所研究員，已退休。一直致力於乳酸細菌的研究和產業化，著有多部相關著作。

前言第一篇　乳酸細菌的分類鑒定第一章　乳酸細菌的分類及有關屬的特性第一節　乳酸細菌的定義及其範圍一、乳酸細菌的定義二、乳酸細菌範圍的界定三、乳酸細菌有關的屬第二節　乳酸細菌的分類位置一、伯傑氏細菌分類系統二、乳酸細菌分類近史三、乳酸細菌在細菌系統中的位置第三節　乳酸細菌有關屬類群的劃分一、乳桿菌屬及其有關屬二、腸球菌屬及其有關屬三、雙歧桿菌屬及其有關屬四、芽孢桿菌和梭菌的有關屬五、近年報道的且尚未編入《伯傑氏系統細菌學手冊》第二版的新屬第四節　乳桿菌屬和有關屬及其特性一、乳桿菌屬（Lactobacillus Beijerinck 1901）二、類乳桿菌屬（Paralactobacillus Leisner et al?2000）三、片球菌屬（Pediococcus Claussen 1903）四、氣球菌屬（Aerococcus Williams et al?1953）五、營養缺陷菌屬（Abiotrophia Bouvet et al?1989，Kawamura et al?1995）六、肉食桿菌屬（Carnobacterium Collins et al?1987）七、堿桿菌屬（Alkalibacterium Ntougius and Russell 2001）八、德瑟茲氏菌屬（Desemzia Stackebrandt et al?1999）九、棍狀菌屬（Isobaculum Collins et al?2002）十、海生乳桿菌屬（Marinilactibacillus Ishikawa et al?2003）十一、毛髮球菌屬（Trichococcus Scheff et al?1984，emend?Liu et al?2002）十二、明串珠菌屬（Leuconostoc van Tieghem 1878）十三、酒球菌屬（Oenococcus Dicks et al?1995）十四、魏斯氏菌屬（Weissella Collins et al?1994）第五節　腸球菌屬和有關屬及其特性一、腸球菌屬（Enterococcus Schleifer et al?1984）二、蜜蜂球菌屬（Melissococcus Bailey and Collins 1983）三、四聯球菌屬（Tetragenococcus Collin et al?1993）四、漫遊球菌屬（Vagococcus Collins et al?1990）五、鏈球菌屬（Streptococcus Rosenbach 1884）六、乳球菌屬（Lactococcus Schleifer et al?1986）七、乳卵形菌屬（Lactovum Matthies et al?2005）第六節　雙歧桿菌屬和有關屬及其特性一、雙歧桿菌屬（Bifidobacterium Orla?Jensen 1924）二、斯氏菌屬（Scardovia Crociani et al?1996，Jian and dong 2002）三、類斯氏菌屬（Parascardovia Crociani et al?1996，Jian and Dong 2002）四、氣斯氏菌屬（Aeriscardovia Simpson et al?2004）五、異斯氏菌屬（Alloscardovia Geert Huys et al?2007）六、另類斯氏菌屬（Metascardovia Okamoto et al?2007）七、奇異菌屬（Atopobium Collins and Wallbanks 1993）八、歐魯森氏菌屬(Olsenella Dewhirst et al?2001)第七節　芽孢桿菌和梭菌有關的屬一、芽孢桿菌屬 (Bacillus) 內屬�乳酸細菌的種二、嗜鹽乳桿菌屬（Halolactibacillus Lshikawa et al?2005）三、糖球菌屬（Saccharococcus Nystrand 1984）四、利斯特氏菌屬 (Listeria Pirie 1940)五、環絲菌屬（Brochothrix Sneath and Jones 1976）六、芽孢乳桿菌屬（Sporolactobacillus kitahara and Suzuki 1963）七、孿生球菌屬（Gemella Berger 1960）八、毛形桿菌屬（Lachnobacterium Whitford et al?2001）第八節　近年報道的乳酸細菌新屬一、矛形細菌屬（Pilibacter Higashiguchi et al?2006）二、嗜果糖乳酸細菌屬（Fructobacillus Akihito Endo et al?2008）三、夏普氏菌屬（Sharpea Morita et al?2008）四、產乳酸細菌屬（Lacticigenium Takao lino et al?2009）第二章　乳酸細菌的分離和培養第一節　選擇分離和培養方法的原則一、乳酸細菌在自然界的生存區域和生活環境二、必需的營養組分三、對氧的要求四、適宜的生長溫度和pH範圍第二節　乳桿菌屬的分離和培養一、半選擇性培養基二、選擇性培養基三、不同生境乳桿菌分離的培養基四、培養的氣態環境和溫度第三節　肉食桿菌的分離和培養一、半選擇性DMRS培養基二、甲酚紅乙酸鉈蔗糖（CTAS) 培養基三、湖底肉食桿菌和水底肉食桿菌的分離和培養四、永凍層肉食桿菌的分離和培養第四節　明串珠菌的分離和培養一、半選擇性培養基二、選擇性培養基第五節　酒球菌的分離和培養一、酸性番茄培養基（ATB培養基）二、果糖吐溫80培養基 (FT 培養基)三、葡萄汁培養液第六節　芽孢乳桿菌的分離和培養一、納亞氏分離法二、東韋氏分離法三、芽孢乳桿菌的培養第七節　腸球菌的分離和培養一、TTC疊氮化鈉培養基(g/L)二、卡那黴素七葉靈培養基三、Proteose蛋白腖甘油磷酸鈉培養基——KF培養基(g/L)第八節　鏈球菌的分離和培養一、適用於鏈球菌樣品轉移的培養基二、分離鏈球菌選擇性的培養基三、鏈球菌的培養第九節　乳球菌的分離和培養一、富集和分離二、乳球菌的分離培養基第十節　雙歧桿菌的分離和培養一、樣品的收集和製備二、雙歧桿菌的分離培養技術三、雙歧桿菌培養基第三章　乳酸細菌的分類鑒定方法第一節　乳酸細菌的分類鑒定特徵及其類別第二節　生化特徵測定方法一、概述二、氧化酶的測定三、過氧化氫酶的測定四、從葡萄糖和葡萄糖酸鹽產酸產氣五、碳水化合物發酵產酸實驗六、澱粉水解七、石蕊牛奶八、明膠液化實驗九、七葉靈水解十、乙醯甲基甲醇實驗 (V?P實驗)十一、硫化氫的產生十二、馬尿酸鹽的水解十三、精氨酸產氨實驗十四、精氨酸水解實驗十五、葡聚糖的產生十六、溶血反應實驗十七、脲酶的測定十八、吡咯烷芳基醯胺酶(PYR)的測定十九、果糖6磷酸鹽磷酸酮酶(F6PPK)實驗二十、氣相色譜測定乳酸及短鏈脂肪酸的分析法第三節　乳酸細菌化學分類特徵的測定分析方法一、乳酸旋光度的化學測定法二、醌的分析方法三、細胞脂肪酸測定法四、細菌細胞壁的組分及分析方法第四節　基因型和系統發育型特徵的實驗方法一、DNA的G+C含量測定二、DNADNA 分子雜交方法三、用PCRELISA反應的鑒定方法四、用全基因組DNA脈衝場凝膠電泳的鑒定方法五、16S rDNA序列同源性的鑒定方法六、用基因組DNA擴增片段長度多態性的鑒定方法七、16S rRNA序列分析方法和系統進化樹的構建第二篇　乳酸細菌發揮生理功能的物質基礎第四章　乳酸細菌細胞壁成分的分離和純化第一節　莢膜多糖的分離和純化一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第二節　脂磷壁酸的分離和純化一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第三節　肽聚糖的分離和純化一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第五章　乳酸細菌產生的糖類物質第一節　產生胞外多糖的菌株和培養基一、產胞外多糖乳酸細菌的分離、篩選二、產胞外多糖的菌株和培養基第二節　胞外多糖的測定方法一、硫酸苯酚法測定多糖合成量二、乾燥稱重法三、高效液相色譜法（HPLC法）四、硫酸蒽酮法第三節　多糖的分離和純化一、概述二、德氏乳桿菌保加利亞亞種胞外多糖的分離和純化三、嗜熱鏈球菌胞外多糖的分離和純化四、複合糖的分離和純化第六章　乳酸細菌產生的抗菌物質第一節　過氧化氫的定量分析一、滴定法——高錳酸鉀氧化法二、分光光度法——辣根過氧化物酶法第二節　細菌素的抑菌活性和效價測定方法一、細菌素抑菌活性的測定方法二、管碟法測定細菌素的效價第三節　產細菌素乳酸細菌的篩選一、細菌素產生菌的篩選二、產乳鏈菌肽菌的篩選(一)三、產乳鏈菌肽菌的篩選 (二)第四節　細菌素的分離和純化一、吸附法初步純化細菌素二、植物乳桿菌KLDS 1?0391所產細菌素的分離和純化三、副乾酪乳桿菌J23所產廣譜抗菌肽BacJ23的分離純化四、嗜酸乳桿菌NX26所產抑菌物質的分離純化第五節　苯乳酸、4羥基苯乳酸和苯乙酸的定性定量分析一、反相高效液相色譜法分析苯乳酸和4羥基苯乳酸二、GCMS法分析苯乳酸和4羥基苯乳酸三、苯乙酸的定性定量分析第六節　3羥基丙醛（3HPA）產生菌的篩選和定性定量分析一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第七章　乳酸細菌產生的其他生理活性物質第一節　γ氨基丁酸的定性定量分析一、定性方法——平面色譜法二、定量方法——HPLC第二節　精氨酸脫亞胺酶的活性測定一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第三節　血管緊張素轉化酶抑制劑的檢測一、具有血管緊張素轉化酶抑制活性的菌株的篩選二、乳源降血壓肽的製備工藝三、血管緊張素轉化酶抑制劑的定性定量分析第四節　葉酸的定性定量分析一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第五節　維生素B12的定性定量分析一、定性鑒別二、定量測定第六節　膽汁鹽水解酶的活性測定一、原理二、材料三、方法和步驟第七節　透明質酸的定性定量分析一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第八節　共軛亞油酸的定性定量分析一、共軛亞油酸高產乳酸細菌的篩選二、共軛亞油酸的定性定量分析第三篇　乳酸細菌在食品、保健品和動物飼料中的應用第八章　乳酸細菌產生的風味物質第一節　乙醛和雙乙醯（丁二酮）的定性定量分析一、乙醛和雙乙醯的提取二、乙醛和雙乙醯的定量分析第二節　支鏈氨基酸的分析一、紙層析色斑洗脫比色法二、高效液相色譜法三、毛細管電泳第九章　乳酸細菌發酵食品第一節　乳酸細菌直投式發酵劑的製備一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第二節　發酵酸奶的實驗一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第三節　發酵乳清型多肽飲料的製備工藝一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第四節　篩選發酵大豆食品的優良菌種一、原理二、材料三、發酵參數四、分析方法第五節　發酵奶酪的實驗一、Cheddar乾酪的製備工藝二、Mozzarella乾酪的製備工藝第六節　人工發酵泡菜一、原理二、材料三、方法與步驟四、注意事項第七節　發酵香腸的實驗一、原理二、材料三、方法與步驟四、注意事項第十章　乳酸細菌微生態製劑的製備第一節　高密度培養一、補料分批培養二、細胞循環培養第二節　粉末製劑的製備一、真空冷凍乾燥法二、噴霧乾燥法第三節　益生菌片的製備一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第四節　乳酸細菌微膠囊的製備一、基於海藻酸鈉的益生菌微膠囊的製備二、空氣懸浮法製備益生菌微膠囊第十一章　動物用益生菌劑和青貯飼料發酵劑第一節　動物用益生菌劑一、芽孢桿菌益生菌劑二、乳酸細菌益生菌劑第二節　青貯飼料用的發酵劑一、飼料作物及牧草上自然分佈的乳酸細菌二、青貯發酵實驗法與乳酸細菌的分離三、快速初篩選青貯飼料優良乳酸細菌四、稻莖秸稈和未利用資源的乳酸細菌的開發與利用五、青貯飼料發酵劑的製備第四篇　乳酸細菌在疾病防治和保健中的應用第十二章　乳酸細菌解毒和分解致癌物質第一節　清除自由基活性的檢測一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第二節　降解生物胺的實驗一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第三節　分解亞硝酸鹽的實驗一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第四節　降解黃麴黴毒素的實驗一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第五節　降低重金屬鉛毒害的實驗一、原理二、材料三、方法和步驟第六節　利用高效液相色譜法檢測乳酸細菌脫基因毒性功能一、原理二、材料三、方法和步驟四、數據處理五、注意事項第十三章　乳酸細菌耐酸、耐膽汁和抗脅迫反應第一節　耐酸、耐膽鹽乳酸細菌菌株的分離與篩選一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第二節　乳酸細菌抗氧化活性的測定方法一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第三節　抗高溫脅迫的實驗一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第四節　抗滲透壓脅迫的實驗一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第十四章　乳酸細菌的免疫功能與延緩衰老第一節　宿主細胞的培養一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第二節　宿主細胞的傳代和保存一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第三節　黏附實驗一、乳酸細菌細胞疏水性測定二、乳酸細菌的黏附性測定三、黏附性雙歧桿菌菌株的篩選四、不同細菌對細胞競爭性黏附第四節　胞外多糖和脂磷壁酸的免疫調節　作用一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第五節　乳酸細菌對Ｔ淋巴細胞亞群的影響一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第六節　乳酸細菌對血清抗體的影響一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第七節　乳酸細菌對黏膜抗體的影響一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第八節　利用秀麗隱杆線蟲評價乳酸細菌延緩衰老的功能一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第五篇　乳酸細菌在工業上的應用第十五章　D乳酸和L乳酸的分析第一節　L乳酸的檢測一、酶法測定L乳酸二、高效液相色譜法測定L乳酸第二節　D乳酸的檢測一、酶法測定D乳酸二、HPLC法測定D乳酸第十六章　乳酸細菌發酵生產乳酸工藝第一節　以葡萄糖為原料生產L乳酸工藝一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第二節　以纖維素為原料生產L乳酸工藝一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第三節　以澱粉質為原料生產L乳酸工藝一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第四節　以花生粕為原料生產D乳酸工藝一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第十七章　發酵產品中乳酸細菌的快速檢測技術第一節　發酵產品中乳酸細菌的快速計數方法一、紙片法二、電阻抗法第二節　發酵產品中乳酸細菌的快速鑒定方法一、實時熒光PCR法二、變性高效液相色譜法第十八章　產甘露醇和多糖水解酶菌的篩選第一節　乳酸細菌發酵液中甘露醇的分析檢測方法一、薄層層析法分析發酵體系中的甘露醇二、分光光度法分析發酵體系中的甘露醇三、高效液相色譜法分析發酵體系中的甘露醇第二節　產甘露醇乳酸細菌的篩選一、產甘露醇乳酸細菌的初步篩選二、產甘露醇乳酸細菌的複篩第三節　多糖水解酶菌的篩選一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第十九章　乳酸細菌噬菌體的檢測、分離純化和防治第一節　檢測噬菌體的方法一、原理二、實驗材料三、實驗方法第二節　噬菌體的分離和純化一、原理二、實驗材料三、實驗步驟第三節　噬菌體的防治一、注重環境衛生二、完善發酵工藝三、生產菌株的輪番使用四、噬菌體抗性菌株的選育第六篇　乳酸細菌安全性評估方法第二十章　乳酸細菌對抗菌藥物的敏感性笫一節　細菌耐藥性表型檢測一、瓊脂稀釋法二、KB紙片瓊脂擴散法三、Etest法第二節　細菌耐藥基因的檢測一、DNA探針法檢測耐藥基因（以β內醯胺酶基因為例）二、PCR方法檢測耐藥基因（以檢測紅黴素耐藥基因為例）第二十一章　乳酸細菌有害酶及代謝產物的檢測第一節　硝基還原酶活性檢測一、定性檢測二、定量檢測第二節　偶氮還原酶活性檢測一、定性檢測二、定量檢測第三節　D乳酸含量檢測一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第四節　β葡萄糖苷酶活性檢測一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第五節　β葡萄糖醛酸苷酶活性檢測一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第六節　生物胺含量檢測一、產生物胺能力的定性檢測二、產生生物胺能力的定量檢測——丹醯衍生物的RPHPLC檢測法第二十二章　基於基因組學的乳酸細菌安全性評價第一節　菌株的全基因組測序一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第二節　基於全基因組的安全性相關信息分析一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第七篇　乳酸細菌的遺傳與變異第二十三章　乳酸細菌DNA的提取和純化第一節　染色DNA的分離和純化一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第二節　乳酸乳球菌質粒DNA的提取一、方法一二、方法二第三節　噬菌體DNA的提取一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第四節　RNA與DNA共提取一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第二十四章　乳酸細菌中基因導入和敲除的方法第一節　乳酸細菌基因組洗牌重組一、原理二、材料和試劑三、方法和步驟四、技術優點第二節　乳酸細菌感受態細胞的製備和電轉化一、乳酸乳球菌感受態細胞的製備和電轉化二、鏈球菌感受態細胞的製備和電轉化三、腸球菌感受態細胞的製備和電轉化四、乳桿菌感受態細胞的製備和轉化五、雙歧桿菌感受態細胞的製備和電轉化第三節　乳酸細菌的基因敲除一、方法一二、方法二第二十五章　細菌素生物合成中功能基因的克隆及作用機制分析第一節　乳鏈菌肽啟動子的誘導表達一、原理二、材料三、方法和步驟第二節　乳鏈菌肽抗性基因的篩選及鑒定一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第三節　乳鏈菌肽抗性基因作用機制分析一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第四節　羊毛硫細菌素的半體外生物合成一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第五節　細菌素生物合成基因簇的克隆及功能分析一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項第六節　細菌素作用機制的分析——孔洞形成能力表徵一、原理二、材料三、方法和步驟四、注意事項乳酸細菌現代研究實驗技術第二十六章　乳酸細菌菌種的保藏和防止退化變異第一節　細菌菌種退化和變異是普遍現象一、引起菌種退化和變異的物質基礎二、引起退化和變異的原因三、防止菌種退化和變異的措施第二節　定期移植保藏法一、原理二、培養基三、方法和步驟四、注意事項第三節　冷凍乾燥法一、原理二、材料三、方法和步驟第四節　液氮超低溫凍結保藏法一、原理二、材料三、方法與步驟第五節　超低溫凍結法保藏一、原理二、材料三、方法和步驟附錄常用培養基組分