二、實驗條件
（1）實驗材料清潔級雄性成年昆明小鼠。
（2）實驗儀器恒溫培養箱，超凈工作臺，恒溫水浴箱，離心機，倒置相差顯微鏡，真空泵，電熱高壓蒸汽滅菌鍋，解剖剪，眼科剪，解剖鑷，培養瓶（150ml或200m1），表面皿，培養皿，吸管，玻璃除菌濾器，小燒杯，青霉素小瓶，血球計數板，吸管橡皮頭，橡皮瓶塞，200目尼龍濾網，50ml、15ml離心管和手術刀片。
（3）實驗試劑磷酸鹽緩沖液（PBS）（不含鈣鎂，pH 7.2），0.25％胰蛋白酶液（pH7.2～7.4），0.53mmol／L EDTA溶液，小鼠成纖維細胞（MEF）生長培養基，高糖DMEM加10％FCSl640培養液（含20％小牛血清），D—Hanks液，小牛血清，青霉素，75％酒精，5％NaHC03液，0.85％NaCl液，三蒸水或雙蒸水，二甲基亞砜（DMSO），丙三醇（甘油）。
三、實驗步驟
1.處死
取昆明小鼠一只，用頸椎脫臼法處死后立即浸入盛有75％酒精的燒杯中消毒處理2～3s，取出后立即放人超凈工作臺中的無菌培養皿中。
2.取材
無菌條件下，左手用鑷子提起小鼠腹部皮膚，右手用解剖剪剪開腹腔和胸腔，可同時剪去部分胸壁以充分暴露胸腔。用另一鑷子輕輕夾起粉紅色的肺組織并將其剪下置于Hanks液中，剪去血管等組織，用手術刀片將其剪碎成1mm×1mm×1mm。再用PBS液或Hanks液漂洗，除凈血液。
3.消化
剪碎的肺組織用5～8倍量的0.25％胰蛋白酶消化40min，且每隔5min輕輕晃動，使之充分消化。胰蛋白酶的消化作用能除去組織中的細胞間質，使組織松散成單個細胞或較小的細胞團。
4.離心
將上層細胞懸液倒入一裝有MEF生長培養基的離心管中，用200目尼龍濾網過濾后，1500r／rain離心5rain收集細胞。沉淀用DMEM重懸，再經800r／min離心5min，上清液經1500r／min離心5min，沉淀為純化的肺成纖維細胞。
