商品簡介
Reduktaza HMG-CoA katalizuje przemianę HMG-CoA w mewalonian, co uznaje się za etap ograniczający szybkośc biosyntezy cholesterolu i innych związk闚 pośrednich szlaku mewalonianowego. Oczyszczony plazmid (pGEXtev/hmgr) zawierający gen ludzkiej reduktazy HMG-CoA zostal zweryfikowany za pomocą analizy restrykcyjnej i sekwencjonowania. Po weryfikacji zostal on transformowany do kom鏎ek kompetentnych Escherichia coli (BL21 i DH5α), przy czym DH5α dala najbardziej obiecujące wyniki. Ekspresję bialka indukowano za pomocą IPTG, a następnie optymalizowano poprzez zmianę stężenia IPTG, betainy, sorbitolu oraz dodanie r?#380;nych bufor闚. Zbadano r闚nież wplyw r?#380;nych temperatur na ekspresję bialka. Gen będący przedmiotem zainteresowania (hmgr) zostal subklonowany do wektora pET 22b. Subklonowany plazmid pET22b/hmgr zostal indukowany w E. coli BL21, a jego ekspresja zostala zoptymalizowana poprzez zastosowanie r?#380;nych stężeń IPTG i pobieranie pr鏏ek przy r?#380;nych wartościach OD (A600). Plazmid pGEXtev/hmgr w DH5α wyraża bialko o masie 54 kDa wraz z tagiem fuzyjnym GST. Bialko sklada się z 283 aminokwas闚, ma masę cząsteczkową 31,1 kDa, a jego teoretyczny punkt izoelektryczny wynosi 7,68.
