商品簡介
L'HMG-CoA r嶮uctase catalyse la conversion de l'HMG-CoA en m憝alonate, 彋ape reconnue comme limitante dans la biosynth鋊e du cholest廨ol et d'autres interm嶮iaires de la voie du m憝alonate. Le plasmide purifi?(pGEXtev/hmgr) contenant le g鋝e de l'HMG-CoA r嶮uctase humaine a 彋?valid?par analyse de restriction et s廦uen蓷ge. Apr鋊 v廨ification, il a 彋?transform?dans des cellules comp彋entes d'Escherichia coli (BL21 et DH5α), parmi lesquelles la souche DH5α a donn?les r廥ultats les plus prometteurs. L'expression prot嶯que a 彋?induite par l'IPTG et optimis嶪 davantage en faisant varier la concentration d'IPTG, de b彋a鮦e et de sorbitol, ainsi qu'en ajoutant divers tampons. L'influence de diff廨entes temp廨atures sur l'expression prot嶯que a 嶲alement 彋?彋udi嶪. Le g鋝e d'int廨皻 (hmgr) a 彋?sous-clon?dans pET 22b. Le plasmide sous-clon?pET22b/hmgr a 彋?induit dans E. coli BL21 et son expression a 彋?optimis嶪 en utilisant diff廨entes concentrations d'IPTG et en pr幨evant des 嶰hantillons ?diff廨entes densit廥 optiques (A600). Le plasmide pGEXtev/hmgr dans DH5α exprime une prot嶯ne de 54 kDa accompagn嶪 d'un tag de fusion GST. La prot嶯ne est compos嶪 de 283 acides amin廥, a un poids mol嶰ulaire de 31,1 kDa et un point iso幨ectrique th廩rique de 7,68.
