高級生物化學實驗（簡體書）

本書是根據國內外生物化學技術的最新研究進展和發展趨勢，結合各高校近十年來的科學研究和實驗教學，經反復修改、充實撰寫而成。編者均為各高等院校從事生物化學教學的資深教師。全書共分8章包含一些生物大分子的分離、層析、電泳等傳統實驗項目，旨在加強研究生基本實驗方法和技能的訓練，同時又編入了近年來發展起來的一些綜合性實驗技術，將生物化學實驗技能集成化。本書宗旨在于培養學生嚴謹求實的科研態度、分工協作的團隊精神、創造性思維和獨立分析與解決問題的能力。書末的附錄還包括了離心原理、常用試劑和溶液的配制等。 本書適用于高等院校農林和生物學等專業研究生和本科生選擇使用。

第一章 緩沖溶液的作用原理及配制
第一節 緩沖溶液的作用原理
一、緩沖溶液的作用原理
二、緩沖容量與緩沖范圍
第二節 緩沖溶液的配制
一、影響緩沖溶液pH的因素及緩沖溶液的選擇與配制
二、緩沖溶液的應用原則
三、不同緩沖溶液的優缺點
第二章 生物材料的預處理
第一節 生物樣品的保存
一、新鮮固態樣品的保存
二、液態樣品的保存
第二節 生物材料預處理技術
一、細胞的破碎
二、提取與純化
第三章 實驗誤差控制
第一節 實驗誤差
一、實驗誤差
二、精密度和偏差
三、實驗誤差的來源
第二節 提高準確度的方法
一、減少系統誤差的方法
二、減少偶然誤差的方法
三、正確取舍有效數字
第四章 蛋白質研究技術與方法
第一節 蛋白質分離純化的一般方法
一、以蛋白質溶解度為基礎的分離方法
二、以蛋白質電荷性質為基礎的分離方法
三、以蛋白質分子大小為基礎的分離方法
四、以蛋白質生物活性為基礎的分離方法
第二節 蛋白質分離純化的新技術與新方法
一、蛋白質二維熒光差異凝膠電泳技術
二、毛細管電泳
三、反相液相色譜法
四、反膠團萃取法
五、蛋白質分離方法的選擇、組合和優化
實驗一 蛋白質含量測定法
Ⅰ.微量凱氏定氮法(Kjeldahl法)
Ⅱ.雙縮脲法(Biuret法)
Ⅲ.Folin-酚試劑法(Lowry法)
Ⅳ.考馬斯亮藍法(Bradford法)
Ⅴ.紫外吸收法
Ⅵ.二喹啉甲酸法(BCA法)
實驗二 小麥鈣調蛋白的分離、 純化
實驗三 小麥鈣調蛋白的抗體制備及檢測
實驗四 植物組織蛋白質二維電泳分離分析
第五章 酶學研究技術與方法
第一節 酶活力測定及酶的純度與回收率
一、酶活力測定
二、純化方法與條件的比較標準
三、純度標準
第二節 酶活力測定的常用技術和方法
一、量氣法
二、比色法與分光光度法
實驗五 苯丙氨酸解氨酶的純化及活性測定
Ⅰ.PAL的提取及測定——離心和鹽析的應用
Ⅱ.PAL的純化——分子篩和離子交換層析的應用
實驗六 Eadie-Hofstee法測定辣根過氧化物酶的Km和vmax
實驗七 酶偶聯分析法測定植物己糖激酶的活力
實驗八 兩相分配法制備大豆子葉質膜及其純度鑑定
實驗九 金屬螯合親和層析分離純化玉米SOD
實驗十 大豆胰蛋白酶抑制劑的分離提取以及生物化學性質表征
第六章 核酸研究技術和方法
第一節 核酸研究的基本要求
一、材料與方法的選擇
二、選擇的原則
三、核酸完整性的保持
第二節 技術路線的設計
一、核酸的釋放
二、核酸的分離與純化
三、核酸質量與提取步驟的關係
四、核酸的濃縮、沉淀與洗滌
實驗十一 植物基因組DNA的提取及含量、純度檢測
Ⅰ.植物基因組DNA的提取(CTAB法)
Ⅱ.植物DNA純度的鑑定——紫外分光光度計法
Ⅲ.植物DNA相對分子質量的測定——瓊脂糖凝膠電泳法
實驗十二 一步法共提取昆蟲中腸DNA、RNA及蛋白質
實驗十三 小RNA的分離純化
Ⅰ.小RNA分離、純化及修飾
Ⅱ.修飾后小RNA的克隆轉化及測序
Ⅲ.測序結果的生物信息學分析
實驗十四 油菜cDNA文庫的構建
Ⅰ.植物組織總RNA的提取及電泳分析
Ⅱ.cDNA文庫的構建
實驗十五 Southern印跡
第七章 糖類研究技術和方法
第一節 糖生物化學研究總論
第二節 糖的提取及純化
第三節 多糖的組成分析
第四節 多糖的結構分析
實驗十六 還原糖和總糖的測定
實驗十七 非還原糖的高效液相色譜分析
實驗十八 可溶性糖的硅膠G薄層層析
實驗十九 黏多糖一肝素效價的測定
實驗二十 水溶性苦瓜多糖的制備及分離純化
實驗二十一 醋酸纖維素薄膜電泳鑑定山楂多糖
實驗二十二 多糖結構分析
Ⅰ.糖含量測定
Ⅱ.單糖組成分析
Ⅲ.糖鏈的序列測定
第八章 植物次生代謝物概述
第一節 次生代謝物的概念與特性
一、次生代謝物的概念
二、次生代謝物的特性
第二節 次生代謝物的研究方法
一、同位素示蹤法
二、細胞培養法
三、熒光標記法
四、單細胞凝膠電泳法
實驗二十三 紅豆杉紫杉醇生物堿的分離與鑑定
實驗二十四 植物倍半萜的分離與酸化度分析
實驗二十五 黃連中黃連素的提取及其紫外光譜分析
Ⅰ.黃連中黃連素的提取
Ⅱ.黃連素的紫外光譜分析
實驗二十六 虎杖蒽醌類成分的提取分離及結構鑑定
實驗二十七 植物材料中總黃酮分離提取及鑑定
實驗二十八 從茶葉中提取咖啡因
附錄
附錄一 離心技術
附錄二 常用蛋白質Mr標準參照物
附錄三 常用緩沖溶液的配制方法
附錄四 實驗室中常用酸堿的相對密度和濃度
附錄五 硫酸銨飽和度的常用表
附錄六 常用相關網站
主要參考文獻